SSIAllchrom 6000型柱后衍生系統
2020版中國藥典應用舉例---伏格列波糖
目的：使用SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系統，考察柱后衍生制冷反應器對伏格列波糖峰柱后衍生化HPLC檢測影響，提高測試伏格列波糖的靈敏度，為伏格列波糖檢測條件的優化提供依據，確
定柱后衍生系統穩定性。
結果：在實驗考察條件下，使用SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系統的峰面積比國家藥品標準規定的反
應管靈敏度高。伏格列波糖在含量測定時，20~100μg/mL范圍內呈線性，R2為0.9995（n=5）。
其系統適應性的RSD為0.24（n=6）。
結論：SSIAllchrom 6000型柱后衍生帶制冷反應器系統測試伏格列波糖操作簡便、準確、重現性好，
適用于該品種的質量控制。
1.色譜條件
色譜柱：Apollo C18柱（4.6*250mm，5μ）；柱溫35℃；，流速0.8mL /min；檢測波長：激發波長為350nm，
發射波長為430nm，柱后衍生；衍生試劑溶液（取?；撬?.25g與高碘酸鈉2.56g，加水溶解并稀釋至
1000mL），反應溫度100℃，冷卻溫度15℃，衍生試劑流速0.8mL /min。磷酸鹽緩沖液（pH3.5）：取磷酸
二氫鈉二水合物3.12g，加水1000mL使溶解，用磷酸調節pH至3.5±0.1。
2.衍生條件的考察
參考文獻及國家藥品標準，伏格列波糖反應浴溫度為100℃，聚四氟乙烯反應管長20m（內徑0.5mm），冷
卻浴溫度為15℃，聚四氟乙烯冷卻管長2m（內徑0.3mm）。SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系統不但能夠滿
足普通PCR的制熱性能，同時還增加了制冷反應器。使用SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系統測試伏格列波
糖時省去了使用冷卻浴操作復雜、溫度差別大的缺點，提高了色譜峰的靈敏度和重復性。
本試驗將熒光檢測器的PMT增益分別設置為600、700、800、900和100，對熒光檢測器的PMT增益進行
了選擇，結果表明PMT為800時，信噪比高，但是增大了PMT的同時也損耗了熒光檢測壽命，建議根據實
驗時的自身要求合理選擇PMT。
3.含量測定
流動相：0.045%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）：甲醇=90:10
供試品制備：取本品10片，研細，置于50mL容量瓶中，加0.045%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）40mL，
充分振搖30分鐘，使伏格列波糖溶解，用0.045%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）稀釋至刻度，搖勻，
放置，取上清液經0.45μm濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
對照品制備：精密稱取伏格列波糖對照品20mg，至100mL容量瓶中，加0.045%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液
（pH3.5）釋至刻度，搖勻；精密量取對照品溶液1、2、3、4與5mL，分別置于10mL容量瓶中，用0.045%
辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）稀釋至刻錄，搖勻。
進樣量：50μL
3.1線性試驗
試驗結果標明，以對照品溶液濃度C（μg/mL）對峰面積A回歸，得回歸方程；A=7567.6C-3117.3，
R2=0.9995（n=5），伏格列波糖濃度在20~100μg/mL范圍內與其峰面積呈良好線性關系。
3.2精密度試驗
取濃度為40mg/mL的對照品溶液，連續進樣6次，其峰面積的RSD為0.24%，保留時間的RSD為0.12%。
3.3樣品測定
按上述測定方法測定2批樣品，結果如下：
4.有關物質測定
流動相：0.12%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）：甲醇=92:8
供試品制備：取本品10片，精密加0.12%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）10mL，浸泡并時時充分振搖
30分鐘，使伏格列波糖溶解，放置，取上清液經0.45μm濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
對照品制備：精密量取1mL供試品溶液，用0.12%辛烷磺酸鈉磷酸鹽緩沖液（pH3.5）稀釋至50mL，作為
對照品溶液。
進樣量：200μL
4.1精密度試驗
取對照品溶液，連續進樣6次，其峰面積的RSD為1.60%，保留時間的RSD為0.35%；
4.2樣品測定
按上述測定方法測定2批樣品，結果見含量樣品測定表。
使用SSIAllchrom 6000型柱后衍生測試伏格列波糖對照品，具有溫度穩定快，流速準確的
特點，增加了制冷反應器后，測試伏格列波糖時操作簡便，峰面積和保留時間精密度高，線性
關系良好。連續測試5天，色譜峰的數據重復性優良。
